Mathilde : Une belle jeune femme qui fait l'objet du désir d'Ambrosio. Elle est finalement tuée par Ambrosio après l'avoir rejeté.
Agnès : Une jeune religieuse qui est l'élève d'Ambrosio. Elle est séduite par Ambrosio et tombe enceinte. Elle finit par mourir en couches.
Don Raymond : L'abbé du monastère où vit Ambrosio. C'est un homme sage et juste qui essaie d'aider Ambrosio à surmonter ses tentations.
Donna Elvira : Une femme riche et puissante qui devient l'amante d'Ambrosio. Elle finit par le trahir et le livre à l'Inquisition.
L'Inquisiteur : Un homme puissant et impitoyable qui préside le procès d'Ambrosio et le condamne finalement à mort.