Initialement, Mickey Mouse se caractérisait par sa silhouette simple et arrondie et ses grands yeux. Iwerks a apporté un raffinement considérable au design de Mickey, en introduisant des changements subtils qui ont amélioré sa personnalité et son expressivité. Il a accentué les oreilles de Mickey et ajouté des cercles noirs à ses yeux, donnant au personnage une apparence plus distinctive et attachante.
Iwerks a également joué un rôle central dans le développement des premières animations de Mickey Mouse. Il a été le pionnier de techniques innovantes telles que l'animation « droit devant » et « pose à pose », qui permettent une plus grande fluidité du mouvement et une représentation plus dynamique du personnage. Ses contributions révolutionnaires ont contribué à faire de Mickey Mouse une icône bien-aimée et un phénomène culturel mondial.