La technique Kirby-Bauer est une méthode microbiologique standard utilisée pour déterminer la sensibilité des bactéries aux agents antimicrobiens. Il s'agit de mesurer la zone d'inhibition de la croissance bactérienne autour de disques imprégnés d'antibiotiques placés sur une plaque de gélose inoculée avec l'organisme à tester. Voici les étapes générales de la technique Kirby-Bauer :
1. Préparation de l'inoculum :
- Une culture pure de la souche bactérienne testée est obtenue et cultivée dans un milieu de culture en bouillon approprié pour atteindre une phase de croissance logarithmique (turbidité).
- La suspension bactérienne est standardisée à une turbidité spécifique, généralement équivalente à une norme de turbidité McFarland de 0,5, afin de garantir une densité d'inoculum constante.
2. Inoculation d'une plaque de gélose :
- Des plaques de gélose stériles contenant de la gélose Mueller-Hinton ou un autre milieu gélose approprié sont utilisées pour le test.
- À l’aide d’un coton-tige stérile, l’inoculum standardisé est réparti uniformément sur la surface de la plaque de gélose pour créer une pelouse confluente de croissance bactérienne.
- La plaque inoculée est laissée sécher quelques minutes pour absorber l'excès d'humidité.
3. Application de disques antibiotiques :
- Des disques antibiotiques stériles contenant des concentrations spécifiques d'agents antimicrobiens sont placés sur la surface de la plaque de gélose à intervalles réguliers à l'aide d'une pince stérile ou d'un distributeur de disques.
- Les disques sont pressés doucement pour assurer un bon contact avec la surface de la gélose sans endommager les disques.
4. Incubation :
- La plaque inoculée avec les disques antibiotiques est incubée à une température appropriée (généralement 35-37°C) pendant une période spécifiée (généralement 16-24 heures) pour permettre la croissance bactérienne et la diffusion des agents antimicrobiens.
5. Mesure des zones d'inhibition :
- Après incubation, les plaques sont examinées pour rechercher la présence de zones d'inhibition autour des disques d'antibiotique.
- A l'aide d'une règle ou d'un pied à coulisse numérique, le diamètre de chaque zone d'inhibition est mesuré en millimètres.
- Le diamètre de la zone indique la sensibilité de l'organisme testé à l'antibiotique spécifique.
6. Interprétation des résultats :
- Les diamètres de zone mesurés sont comparés à des tableaux ou lignes directrices standardisés, tels que ceux fournis par le Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), pour déterminer la sensibilité ou la résistance de l'organisme testé aux agents antimicrobiens testés.
- Les organismes sont classés comme sensibles, intermédiaires ou résistants en fonction de la taille des zones d'inhibition et des critères d'interprétation établis.
7. Contrôle qualité :
- Pour garantir l'exactitude et la fiabilité de la technique Kirby-Bauer, des souches de contrôle qualité présentant des profils de sensibilité connus sont incluses dans chaque lot de tests pour surveiller les performances de la méthode et des réactifs utilisés.
Il est important de suivre des procédures standardisées et d'interpréter les résultats conformément aux directives établies pour obtenir des informations fiables et cliniquement pertinentes à partir des tests de sensibilité aux antibiotiques Kirby-Bauer.