Il n'est jouable que dans le jeu 16 bits Sonic &Knuckles , qui a été publié sous forme de cartouche séparée. Vous pouvez ensuite insérer la cartouche Sonic &Knuckles sur une cartouche Sonic the Hedgehog 3 pour déverrouiller la fonctionnalité « Verrouillage » , vous permettant d'incarner Knuckles dans une nouvelle version du jeu.
Bien que Knuckles ne soit pas directement jouable dans Sonic 3, il apparaît comme un boss dans le jeu.