- Elizabeth Shaw : Un jeune scientifique qui fait partie de l'équipage du vaisseau spatial Prometheus. Elle est poussée par sa foi à trouver les Ingénieurs, les créateurs de l'humanité.
- David : Un androïde qui est également membre de l'équipage Prometheus. Il est très intelligent et curieux, mais aussi impitoyable et calculateur.
- Weyland : Le PDG de Weyland Corp., la société qui a financé l'expédition Prometheus. Il est obsédé par la recherche des ingénieurs et par l'obtention de l'immortalité.
- Meredith Vickers : Le représentant de Weyland Corp. sur le Prometheus. C'est une femme d'affaires impitoyable et ambitieuse, prête à tout pour atteindre ses objectifs.
- Janek : Le capitaine du Prométhée. C'est un astronaute vétéran qui essaie d'assurer la sécurité de son équipage tout en remplissant les objectifs de la mission.
- Creux : Un biologiste sur le Prométhée qui est le partenaire romantique de Shaw. Il est fasciné par les Ingénieurs et leurs créations.
- Fifield : Un géologue sur le Prométhée désireux d'explorer la lune extraterrestre. Il est imprudent et impulsif, se mettant souvent ainsi que ses coéquipiers en danger.