- L'épouse d'Horatio Caine, Marina, jouée par Sofia Milos : Marina Caim était l'épouse d'Horatio pendant les premières saisons de la série. Elle était à l'origine une détective privée qui aidait Horatio sur certaines affaires. Cependant, leur mariage s'est finalement effondré en raison du dévouement d'Horatio à son travail.
- Calleigh Duquesne, jouée par Emily Procter : Calleigh Duquesne est une CSI niveau 3 et la fille d'un policier de Miami. Elle est une médecin légiste compétente et est connue pour son expertise en analyse ADN et en identification d'armes à feu.
- Natalia Boa Vista, jouée par Eva LaRue : Natalia Boa Vista rejoint l'équipe dans la saison 5 en tant que CSI niveau 2. Elle est une ancienne policière infiltrée et possède une formation en psychologie, ce qui l'aide à comprendre les motivations des criminels.
- L'épouse de Delko, Marisol Delko, jouée par Elizabeth Berkley Lauren : Marisol Delko est l'épouse d'Éric Delko. Ils se marient lors de la finale de la saison 4. Marisol travaille également comme détective d'homicide à Miami.
- Yelina Salas, jouée par Sofia Vassilieva : Yelina Salas rejoint l'équipe dans la saison 9. Elle est la fille d'un gangster russe et connaît le fonctionnement interne des organisations criminelles.